ELISA,全稱酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay)。在生物學免疫實驗方法中常見的技術。這種技術廣泛應用于生物學、醫(yī)學、食品安全、環(huán)境檢測和藥物帥選等領域。
ELISA基本原理是將抗原或抗體吸附在固相載體上,通過酶標記的抗原抗體反應進行檢測。那么,elisa有哪些主要類型呢?
在酶聯(lián)吸附測定實驗中,elisa主要類型有直接ELISA、間接ELISA、競爭ELISA和夾心ELISA。比較常用的是夾心ELISA和競爭ELISA。上海通蔚針對這兩種類型重點為大家介紹下區(qū)別。如果你想了解ELISA其它類型,可以參考《elisa試劑盒有哪幾種類型?elisa四類型圖解》。
Elisa夾心法
Elisa夾心法是將特異性抗體結合到固相載體上形成固相抗體(捕獲抗體),然后和待檢樣本中的相應抗原結合形成免疫復合物,洗滌后再加酶標記抗體(檢測抗體),與免疫復合物中抗原結合形成酶標抗體—抗原—固相抗體復合物,加底物顯色,判斷抗原含量。整個過程中,待檢抗原經(jīng)過捕獲抗體和檢測抗體雙重篩選,具有高特異性。
Elisa夾心法的優(yōu)點是特異性高、靈敏度高,但其主要缺點是捕獲抗體和檢測抗體之間存在相互作用。
Elisa競爭法
ELISA競爭法預先將抗原包被在固相載體上,并加入酶標記的特異性抗體,實驗時,加入待檢抗原(或抗體),如果待檢物是抗原,則待檢抗原于預先包被在固相載體上的抗原競爭結合酶標抗體,如果待檢測物是抗體,則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標抗體競爭結合包被在固相載體上的抗原,通過洗滌洗掉被競爭結合的酶標抗體,最后加底物顯色,需要注意的是顯色結果與待檢抗原(或抗體)的量成反比。
Elisa競爭法的優(yōu)點是適合檢測小抗原,適合檢測復雜樣品,特異性高,靈敏度高。但是,它有一些缺點,例如每次ELISA都需要標記抗體,這可能導致抗體失活,隨著靶抗原的增加信號會降低。
Elisa實驗選擇夾心法還是競爭法?
1.根據(jù)待測物質(zhì)的大小:若待測物質(zhì)為大分子抗原,如蛋白質(zhì)、多糖等,建議選擇夾心法;若待測物質(zhì)為小分子抗原或抗體,則競爭法可能更為合適。
2.根據(jù)實驗需求:若需要高靈敏度的檢測,夾心法通常是更好的選擇;若需要進行定量或半定量檢測,競爭法則可能更適合。
3.考慮實驗操作的復雜性:夾心法相對復雜,需要兩種特異性抗體;而競爭法則相對簡單,但可能需要在實驗設計和數(shù)據(jù)分析上投入更多精力。
上述通蔚生物為大家介紹這兩種ELISA類型的區(qū)別,作為實驗室較為常用的酶聯(lián)技術,它們有各自特點。具體使用方法結合實驗需求及檢測物質(zhì)大小來確定。如果您還有關于這兩種類型ELISA其它問題,歡迎前來咨詢。