發(fā)布時間:2023-12-08 發(fā)布作者:上海通蔚生物
生物技術(shù)發(fā)展至今,為如今的科研技術(shù)帶來了突破,比如我們常見的ELISA、PCR等試劑盒技術(shù)。今天,就PCR技術(shù)小蔚為各位嘮叨一下其原理和步驟。
PCR又叫聚合酶反應或簡稱PCR,它提供了一種復制更多DNA部分的方法。PCR這項技術(shù)不需要在細胞中發(fā)生,實驗過程中常用的有PCR試劑盒,可以利于試劑盒進行實驗。寫到這里,你可能想知道PCR是如何工作的?為什么要復制更多DNA的某些特定部分?接下來鑒定回答一下這兩個問題。
我們想要復制DNA部分,我們需要了解一下PCR實驗組成,通常PCR組成包括DNA模版
引物、DNA聚合酶。由于PCR使用是熱量,因此使用的DNA聚合酶通常是耐熱型DNA聚合酶。常用到的聚合酶是Taq聚合酶,一種耐熱的聚合酶。Taq DNA 聚合酶來源于 Thermus aquaticus,這是一種在 70°C 以上溫度下生長的極端嗜熱真桿菌。這意味著 Taq DNA 聚合酶在大約 72°C 溫度下發(fā)揮最佳酶活性。這種熱穩(wěn)定性使Taq聚合酶成為PCR的理想選擇。
我們還需要DNA核苷酸來構(gòu)建DNA聚合酶,我們可以通過三個步驟來了解PCR構(gòu)成。我們這里將在用一個雙鏈DNA分子進行說明,并假設這是我們需要復制的。
變性。酶變性使用一種方法是使用熱量,此步驟涉及添加分離DNA分子兩條鏈所需的熱量。
退火。現(xiàn)在已經(jīng)被熱量分開的兩條DNA鏈將被量確并被引物鏈接起來,此步驟溫度應允許引物與您想要擴增(既復制)的特定DNA片斷結(jié)合。
DNA合成。通過DNA合成,我們將制造更多DNA副本。為此,DNA聚合酶將開始在兩條鏈上工作,并將實驗DNA核苷酸作為其構(gòu)建材料來擴增DNA。需要注意的是,這一步的溫度可能比上一步要高一些。適合所用特定DNA聚合酶的理想溫度。
通過上述步驟,完成一個循環(huán)后,你就會得到兩個雙鏈DNA分子。上述PCR實驗步驟有點類似于細胞內(nèi)DNA復制的情況。你可以重復上述步驟,現(xiàn)在你有兩個雙鏈DNA分子,因此,你需要重復變性、退火和DNA合成步驟。你現(xiàn)在有四個雙鏈DNA分子,您再次重復步驟,你現(xiàn)在有八個,依次類推就可以復制多個。
PCR使用非常廣泛,PCR被用于許多研究實驗室,并在法醫(yī)學,基因檢測和診斷方面也有實際應用。例如,PCR用于從患者的DNA中(或在產(chǎn)前檢測的情況下從胎兒DNA中)擴增與遺傳疾病相關(guān)的基因。 PCR還可用于測試患者體內(nèi)的細菌或DNA病毒:如果存在病原體,則可以從血液或組織樣品中擴增其DNA區(qū)域。
關(guān)于PCR就介紹這里,上海通蔚也有PCR試劑盒,專為科研實驗使用。如果您對PCR及試劑盒感興趣,也歡迎來電。