在實(shí)驗(yàn)室里，沒有什么比細(xì)胞無法生長或細(xì)胞培養(yǎng)物無法附著更令人抓狂的了。細(xì)胞生長受阻和培養(yǎng)行為不穩(wěn)定會延誤項(xiàng)目、讓團(tuán)隊(duì)感到沮喪，并使科研人員疑惑到底出了什么問題以及如何解決。

  這些問題的解決方案并不總是那么簡單。細(xì)胞培養(yǎng)很復(fù)雜，需要花時間來分析過程并找出問題。通常，最常見的問題包括異常生長模式或細(xì)胞附著不均勻或不一致。其他問題包括生長速度緩慢或突然變化或無法解釋的結(jié)果。

  這些問題往往與培養(yǎng)技術(shù)、孵化和培養(yǎng)基有關(guān)。跟隨上海通蔚生物一起探討一下這些痛點(diǎn)，以及如何通過良好的做法預(yù)防它們的影響。

  什么原因?qū)е录?xì)胞培養(yǎng)失敗？如何處理？

培養(yǎng)技術(shù)

  細(xì)胞培養(yǎng)是一個復(fù)雜的過程，任何步驟的失誤都可能導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)問題時，首先要評估的是處理技術(shù)，因?yàn)樘幚聿划?dāng)是導(dǎo)致失敗的常見原因。下面通蔚生物為大家盤點(diǎn)幾種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中比較常見的原因：

  細(xì)胞接種物處理不均勻或混合不充分會產(chǎn)生泡沫，從而阻礙細(xì)胞生長和附著，并在容器上留下斑點(diǎn)。使用無菌吸管或移液器輕輕混勻細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布在培養(yǎng)容器中。避免過度混合，以免產(chǎn)生泡沫。

  靜電會破壞塑料容器中的細(xì)胞附著，尤其是在干燥環(huán)境。打開容器時，盡量不要讓容器與包裝摩擦。擦拭容器外部或使用防靜電設(shè)備也可以阻止靜電。

  細(xì)胞接種量不足會導(dǎo)致容器壁上細(xì)胞生長過快。根據(jù)細(xì)胞類型和培養(yǎng)面積選擇合適的接種量。觀察細(xì)胞生長情況，及時調(diào)整接種量。

  滾輪瓶的旋轉(zhuǎn)速度可能會導(dǎo)致大量生長或結(jié)塊。將起始速度設(shè)置為每分鐘半轉(zhuǎn)至每分鐘一轉(zhuǎn)之間，并根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。保持滾輪清潔，以防止打滑或失速。

  定期觀察細(xì)胞生長情況，注意細(xì)胞形態(tài)、密度、生長速度等變化。通常可以判斷出出現(xiàn)了問題。為了最好地檢測這些問題，使用戊二醛或乙醇固定樣本培養(yǎng)物，然后在觀察前對其進(jìn)行染色。除了上述培養(yǎng)技術(shù)中幾個問題，下面為大家也列出關(guān)于孵化和細(xì)胞培養(yǎng)基問題。

  孵化問題

  盡管使用培養(yǎng)箱的目的是盡量減少溫度變化等環(huán)境因素，但許多變量仍然會影響生長速度和培養(yǎng)活力：

  在實(shí)驗(yàn)過程中反復(fù)打開培養(yǎng)箱會導(dǎo)致溫度變化；容器的堆放方式和位置也會導(dǎo)致溫度變化。除非迫不得已，否則不要打開培養(yǎng)箱，并將關(guān)鍵培養(yǎng)物放在后面。還要考慮堆放培養(yǎng)皿的位置效應(yīng)；最下面的培養(yǎng)皿最靠近金屬架，因此加熱速度更快。

  蒸發(fā)影響細(xì)胞生長速度和模式；保持水箱充滿水并使用氣體洗滌缸加濕進(jìn)入的氣體可最大限度地減少蒸發(fā)。

  振動會導(dǎo)致細(xì)胞生長異常，例如形成同心細(xì)胞環(huán)。振動可能來自孵化器中松動的風(fēng)扇馬達(dá)，也可能來自其他任何來源，例如人流或電動設(shè)備。將孵化器放置在堅(jiān)固的表面上，且沒有其他會振動的設(shè)備。

  其他環(huán)境預(yù)防措施，如保持孵化器水平且不含有毒雜質(zhì)，對于正常生長也至關(guān)重要。

  細(xì)胞培養(yǎng)基問題

  培養(yǎng)基缺陷并不總是可見的，許多因素（例如試劑質(zhì)量不足、緩沖液和過濾，甚至熒光毒性）都會影響培養(yǎng)基的功能。

  除了確保你使用正確的配方進(jìn)行研究并購買高質(zhì)量的用品外，測試培養(yǎng)基功能的最佳方法是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將有問題的培養(yǎng)基與其他制造商的相同培養(yǎng)基進(jìn)行比較。如果新培養(yǎng)基產(chǎn)生相同的結(jié)果，則可能是技術(shù)或孵化方面的問題。

  上述為大家羅列出細(xì)胞培養(yǎng)過程經(jīng)常遇到的一些問題，大家如果遇到細(xì)胞培養(yǎng)問題，可以逐一的去找到對應(yīng)原因進(jìn)行解決問題。如果對細(xì)胞培養(yǎng)還有什么疑問，歡迎前來咨詢通蔚生物，通蔚生物有多年的細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，包括代測服務(wù)。同時也祝您今后細(xì)胞培養(yǎng)更上一層樓。