發布時間:2021-11-24 發布作者:上海通蔚生物
通蔚生物帶您了解BCA法-總蛋白是如何操作的有哪些原理呢?
原理BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上最常用蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成,實現了蛋白濃度測定的簡單,高穩定性,高靈敏度和高兼容性.檢測濃度下限達到25微克1毫升,最小檢測蛋白量達到0.5微克,待測樣品體積為120微升。
BCA法-總蛋白以下操作步驟
一.標準曲線的繪制:各管 按照下表加入試劑孔號01234567蛋白標準溶液( μL) 05 10 2040 6080 100去離子水( uL) 100 95 90 80 604020 0對應蛋白含量( μg) 02.55.10.0 20.0 30.0 40.0 50.0
二.根據樣品數量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B ( 50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻:
三.各管充分混勻,37C放置 30分鐘,然后在562nm下比色測定。以蛋白含量( μg)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪出標準曲線:
四.稀釋待測樣品至合適濃度,樣品稀釋液總體積為100 ul,加入bca工作液1000μL,充分混勻,37C放置 30分鐘后,以標準曲線0號管做參比,在562nm波長下比色,記錄吸光值
BCA法-總蛋白先按說明書清點試劑盒里的試劑和物品,然后進行標曲稀釋和BCA工作液的配制,之后以血清樣本為例,進行實驗。整個過程包括標曲稀釋,試劑準備,樣本準備,實驗操作,儀器檢測以及數據處理。