在酶聯免疫吸附實驗（ELISA）中有多種ELISA類型，其中較為常見的是直接和間接ELISA類型，這兩種類型大多數人往往會容易混淆，尤其是對于新手來說。今天上海通蔚針對這個問題寫一篇直接和間接ELISA區別，對于剛拿到ELISA試劑盒實驗人員選擇那種檢測類型至關重要。

圖1 elisa類型

  直接ELISA

  直接ELISA的主要優勢在于其操作步驟簡單、快速，并且在使用高特異性抗體的情況下，由于省去了二抗，可以減少由二抗帶來的非特異性結合及潛在的交叉反應。它使用直接偶聯了酶標記的一抗與目標抗原結合。然而，直接ELISA的靈敏度通常較低，因為它缺乏信號放大步驟。每個抗原分子最多只能結合一個標記的抗體，不像間接ELISA那樣，一個一抗可以結合多個標記的二抗，從而實現信號放大。因此，直接ELISA在檢測低豐度抗原方面可能存在困難。此外，直接ELISA需要為每個目標抗原制備一種特異的酶標記抗體，這限制了它的應用范圍。

  雖然直接ELISA的應用范圍不如間接ELISA廣泛，但在特定情況下，例如快速檢測、高豐度抗原檢測以及需要減少潛在交叉反應性的場合，它仍然是一個有價值的工具。

  間接ELISA

  間接ELISA的主要優勢在于其高靈敏度。由于二抗可以與一抗上的多個位點結合，從而實現信號放大，使得即使在樣本抗原含量較低的情況下也能有效檢測。此外，間接ELISA具有很高的靈活性，因為可以使用各種不同標記的二抗與同一一抗配對，以適應不同的檢測需求和平臺，無需重復標記一抗。例如，研究人員可以根據實驗需要選擇酶標、熒光標記或其他類型的二抗。

  然而，間接ELISA也存在一些缺點。其中最主要的缺點是存在潛在的交叉反應性。這是因為二抗可能與樣品中除目標抗原以外的其他蛋白發生非特異性結合，或者使用的二抗本身特異性不高，從而導致假陽性結果。因此，選擇高質量、高特異性的二抗對于減少交叉反應至關重要。

  檢測抗體

  抗體在許多生物醫學應用中起著至關重要的作用，例如ELISA（酶聯免疫吸附測定）。ELISA利用抗體與目標抗原特異性結合的特性來檢測和定量樣品中的抗原或抗體。ELISA的基本原理是將抗原或抗體固定在固相載體上，然后加入樣品和標記的抗體（或抗原）。在ELISA中，根據不同的實驗設計，可以使用直接標記的抗體（直接ELISA）或未標記的一抗和標記的二抗（間接ELISA等）。

  在直接ELISA中，檢測抗體預先標記有報告酶，如辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(ALP)。當標記抗體與抗原結合后，加入底物會引發酶促反應，產生可檢測的信號，例如顏色變化或化學發光。在一定濃度范圍內，該信號的強度與樣品中抗原的濃度成正相關。

  為了確保ELISA結果的準確性和可靠性，需要使用高度特異性的抗體，以最大限度地減少交叉反應和非特異性結合，從而降低假陽性率。制備高特異性抗體需要精心設計和嚴格的質量控制。此外，ELISA的操作步驟，例如包被、洗滌和孵育，也需要嚴格控制，以確保結果的可靠性。

  常見問題解答

  1.夾心ELISA與直接和間接ELISA有何不同？

  夾心ELISA使用兩種針對目標抗原不同表位的抗體：一種未標記的“捕獲”抗體包被在板上，用于捕獲抗原；另一種標記的“檢測”抗體用于檢測結合到捕獲抗體的抗原。與直接或間接ELISA將抗原直接包被在板上不同，夾心ELISA通過兩種抗體的協同作用來提高特異性和靈敏度，尤其適用于復雜樣品中低濃度抗原的檢測。

  2.間接ELISA是否使用多種類型的抗體？

  是的。間接ELISA使用兩種抗體：一種未標記的“一抗”用于特異性結合目標抗原，一種標記的“二抗”用于檢測結合到抗原上的一抗。二抗是針對一抗物種來源的抗體，例如如果一抗是小鼠來源的，就需要使用抗小鼠的二抗。

  3.哪種ELISA更準確？

  ELISA檢測的準確性取決于多種因素，包括抗體的特異性和親和力、試劑的質量、操作的規范性以及具體的檢測方案。一般而言，夾心ELISA由于使用了兩種抗體，通常比直接和間接ELISA具有更高的特異性和靈敏度。直接ELISA的步驟較為簡單，但靈敏度較低，更適用于高濃度抗原的檢測。間接ELISA的靈敏度較高，但也更容易出現交叉反應。選擇哪種ELISA方法需要根據具體的實驗需求和目標抗原的特性來決定。

  間接ELISA使用兩種抗體：一種未標記的一抗特異性識別并結合目標抗原，另一種是標記的二抗，用于檢測結合了抗原的一抗。

  與直接ELISA相比，間接ELISA可以顯著放大信號并提高靈敏度，因為多個二抗分子可以結合到一個一抗分子上，從而產生更強的信號。然而，間接ELISA的操作步驟比直接ELISA更復雜，需要額外的二抗孵育和洗滌步驟，因此孵育時間也更長。

  總而言之，直接和間接ELISA各有優缺點。直接ELISA操作簡便、快速，但靈敏度較低。間接ELISA靈敏度高，但操作步驟更復雜，耗時更長，且存在潛在的交叉反應風險。選擇哪種方法取決于具體的實驗需求和目標。為了確保ELISA檢測的準確性，需要仔細優化各種實驗條件，包括選擇高特異性和高親和力的抗體、合適的封閉劑、優化的洗滌方案以及合適的底物和酶標讀數儀等。