一本大道香蕉高清久久-一本大道香一蕉久在线影院-一本大道在线视频-一本岛高清v不卡免费一三区-一本到视频在线-一本到亚洲网

歡迎來到上海通蔚!
請登錄 注冊 購物車

021-54845833/15800441009

品質保證 · 通蔚試劑

首頁>>ELISA技術支持>>ELISA樣本處理?不同類型ELISA樣本處理方法比較

ELISA技術支持

相關新聞

相關產品

ELISA樣本處理?不同類型ELISA樣本處理方法比較

發布時間:2024-09-18     發布作者:上海通蔚生物

  ELISA(酶聯免疫吸附試驗)是一種用于量化樣本中目標靶標的技術。常見樣本包括血液(血清和血漿)、組織勻漿、細胞裂解物和細胞培養上清液。ELISA獲得的結果可能受到樣本的收集、處理和儲存方式的影響。本問為您介紹ELISA樣本處理方法。


  目錄


  血液


  組織勻漿


  細胞裂解物


  細胞培養上清液


  一、血液


  全血樣本含有多種成分。主要成分是血細胞(紅細胞、白細胞和血小板)和血液的液體成分。全血可以離心,使血細胞與血液分離。根據血液的制備方式,所得液體將是血清或血漿。


  血清


  血清是血液中不含血細胞或凝血因子的成分。它本質上與血漿相同,但不含纖維蛋白原。凝固的血液會產生不含纖維蛋白原的血清,但可能殘留一些凝血因子。


  制備方案:


  1.使用血清分離管收集血清,在室溫下靜置1-2小時或在4°C下靜置過夜。


  注意:血液樣本靜置后會自然凝結;溫度越低,凝結過程越慢。


  2.1000×g的速度離心20分鐘。


  3.將上清液轉移到干凈的試管中并立即分析或儲存在4°C(最多一周)、-20°C(最多一個月)或-80°C(最多兩個月)下。避免反復凍融。在進行分析前將樣品恢復至室溫。


  血漿


  血漿是血液的一種成分,構成血細胞(紅細胞、白細胞和血小板)周圍的細胞外基質。抗凝(未凝固)的血液會產生血漿,其中包括纖維蛋白原和凝血因子。如果目標分析物是凝血因子,建議使用血漿作為樣品類型,而不是血清。


  血漿樣本需要抗凝。抗凝劑的選擇取決于目標分析物。通常使用2%EDTA1%肝素或3.8%檸檬酸鈉。應避免溶血,因為這會釋放蛋白酶,從而導致樣本中存在的目標分析物降解。高脂質濃度會導致溶血,因此也應避免。


  制備方案:


  1.將血漿收集到含有所需抗凝劑的試管中。


  2.收集后30分鐘內,在2-8°C下以1000×g離心15分鐘。


  3.將上清液轉移到干凈的試管中并立即分析或儲存在4°C(最多一周)、-20°C(最多一個月)或-80°C(最多兩個月)下。避免反復凍融。在進行分析前將樣品恢復至室溫。


  檸檬酸鈉


  血液中的Ca2+通過鈣依賴性凝血途徑促進凝血。檸檬酸鈉螯合游離Ca2+離子,抑制這些途徑,從而防止凝血。


  優點:適用于大多數情況,不影響凝血因子。


  缺點:抗凝作用弱,溶解性差。


  建議用法:檸檬酸鈉(109mmol/L):血液比例為19;或檸檬酸鈉(106mmol/L):血液比例為14


  乙二胺四乙酸


  血液中的Ca2+通過鈣依賴性凝血途徑促進凝血。乙二胺四乙酸(EDTA)螯合游離的Ca2+離子,使其不再處于游離狀態,從而阻止凝血。


  優點:適用于大多數情況,不影響紅細胞或白細胞。


  缺點:影響血小板聚集,不適合檢測凝血或血小板因子。


  建議使用方法:EDTA15g/L):血液比例為1:10


  肝素


  抗凝血酶III是一種抑制凝血途徑中多種酶(主要是絲氨酸蛋白酶)的蛋白質。肝素與抗凝血酶III結合,將其激活,導致抗凝血酶III活性增加,從而增強抗凝血作用。


  優點:抗凝效果強,不改變血細胞體積,高溫下穩定,不易溶血。


  缺點:引起白細胞聚集,抗凝效果短暫。


  建議用法:肝素(1g/L):血液比例為1:10


  二、組織勻漿


  組織勻漿的實驗方案取決于用作樣本的確切組織。可能需要添加蛋白酶抑制劑以防止目標分析物降解。一些組織樣本(如肝臟、腎臟、腦組織)可能會產生假陽性結果,因為內源性生物素會與親和素和鏈霉親和素相互作用。


  制備方案:


  1.用冰冷的PBS沖洗組織以去除多余的血液。在均質化之前稱量組織。


  2.將組織切碎,在冰上用組織勻漿器在PBS中勻漿,并對細胞懸浮液進行超聲處理。


  3.5000×g的速度離心5分鐘,以去除所有沉淀物。


  4.將上清液轉移到干凈的試管中并立即分析或儲存在4°C(最多一周)、-20°C(最多一個月)或-80°C(最多兩個月)下。避免反復凍融。在進行分析前將樣品恢復至室溫。


  三、細胞裂解物


  細胞必須先裂解才能進行ELISA檢測。細胞裂解可通過物理方法(如超聲波或凍融循環)或化學方法(如RIPATritonX-100NP-40SDS、脫氧膽酸鈉、β-巰基乙醇、DTT、尿素)誘導。通常,物理方法優于化學方法,因為化學洗滌劑會影響ELISA獲得的結果。建議使用1%濃度的TritonX-1001%NP-40,因為這足以裂解細胞,同時對ELISA吸光度值沒有或幾乎沒有明顯影響。


  建議方案:


  1.用胰蛋白酶分離貼壁細胞,然后離心并收集上清液。對于懸浮細胞,離心并收集上清液。


  2.用冰冷的PBS清洗細胞三次,然后用PBS重新懸浮。


  3.用超聲波裂解細胞四次。或者,將樣品凍融(-20°C至室溫)三次。


  5.2-8°C下以1500×g離心10分鐘,以去除任何細胞碎片。


  將上清液轉移到干凈的試管中并立即分析或儲存在4°C(最多一周)、-20°C(最多一個月)或-80°C(最多兩個月)下。避免反復凍融。在進行分析前將樣品恢復至室溫。


  四、細胞培養上清液


  如果目標分析物是分泌蛋白,則建議使用細胞培養上清液作為樣品類型。


  制備方案:


  1.1000×g的速度離心20分鐘,以去除所有沉淀物。


  2.將上清液轉移到干凈的試管中并立即分析或儲存在4°C(最多一周)、-20°C(最多一個月)或-80°C(最多兩個月)下。避免反復凍融。在進行分析前將樣品恢復至室溫。


  上述為大家介紹了常見ELISA樣本處理,正確的樣本處理有助于提高ELISA實驗的準確性。除了常見的樣本制備之外,根據目標分析物,可以測試其他樣本,例如皮膚、尿液、糞便、支氣管肺泡灌洗液、胸膜液、唾液、腦脊液等。本篇篇幅有限,下次詳細介紹。

主站蜘蛛池模板: 欧美色xxx| 亚洲欧美人成综合在线最新| www天天干| 91尤物在线视频| 一级黄色片网站| 涩涩视频在线观看| 老王午夜69精品影院| 九九色综合| 成人18毛片| 亚洲欧美日韩高清在线看| 日韩欧美高清| 久久精品国产69国产精品亚洲| 国产va| 亚洲香蕉视频| 全黄h全肉边做边吃奶在线观看| 久久99精品这里精品动漫6| 成人四虎影院| 亚洲免费大片| 欧美综合亚洲| 狠狠干奇米| 91探花视频在线观看| 我爱52avαv永久网站| 免费一区二区三区四区五区| 国产午夜精品久久久久| 中文字幕精品一区二区三区视频| 神马不卡| 久久精品免费一区二区视| 第一区免费在线观看| 亚洲乱淫| 欧美日韩免费大片| 国产午夜精品久久久久九九| 中国女人内谢69xxxxx高清| 午夜欧美精品久久久久久久久| 欧美精品99久久久久久人| 国产片一级aaa毛片视频| 在线成人国产| 日本中文字幕不卡| 精品无人区乱码一区2区3区| 99爱在线视频| 四虎永久影院永久影库| 久久久久欧美精品三级|