常見問題

解決方案

1.標準溶液不正確：使用錯誤濃度的標準起始溶液可能會導致標準稀釋不足或過度稀釋，從而導致 OD 偏差并使標準曲線超出范圍。

仔細檢查標準儲備液濃度、稀釋計算和稀釋度。如果您要從凍干小瓶中重構標準品，請確保遵循廠家的說明。建議渦旋小瓶以確保完全重構。

2.降解標準：舊的或儲存不當的標準可能已經降解，導致 OD 值低于未降解的標準。

驗證標準是否已正確配制并適當存儲。

3.曲線不符合比例：有時，即使您認為曲線繪制正確，您仍可能觀察到比平時更高或更低的 OD 值。這可能是由于檢測試劑批次不同等因素導致吸光度變化。

首次使用特定廠家的 ELISA 試劑盒時，請確保使用推薦的曲線擬合模型，通常是 4 或 5 參數邏輯曲線擬合模型 (4-PL 或 5-PL)。如有必要，請嘗試其他曲線擬合模型，如對數-對數。一致性是關鍵，因此更改曲線擬合模型可能會導致您的結果在檢測之間無法比較，尤其是在需要絕對值的情況下。

4.移液誤差：向板中添加樣品時可能會發生移液誤差，例如樣品量不正確或變異系數 (CV) 過高。

為了最大限度地減少移液錯誤，請確保移液器吸頭牢固連接，在試劑和樣品之間更換吸頭，消除孔或移液器吸頭中的氣泡，將試劑/樣品分配到孔的側面，并通過連續的抽吸/分配循環沖洗吸頭。

常見問題

解決方案

1.無樣品信號，但標準品和/或 QC 樣品良好

1.如果您的標準/校準曲線和/或QC樣品顯示信號，但您的樣品沒有（如預期），則您的樣品可能有問題。可能出現以下幾種問題：

2.使用新的樣本基質：并非所有ELISA都適用于所有樣本類型，使用不同樣本類型可能需要咨詢廠家或重新開發檢測方法。

3.稀釋度過高：樣品過度稀釋超過ELISA的靈敏度可能會導致信號丟失。

4.分析物低于檢測限：樣本中可能含有分析物不足，低于ELISA的檢測限。

5.降解樣本

零信號

有多種潛在原因可導致零信號產生：

1.孵育時間/溫度：驗證孵育時間和溫度是否符合制廠家的說明要求，以避免影響檢測動力學。

2.捕獲/檢測抗體不足/不正確：仔細檢查抗體稀釋度，特別是內部制備的試劑，并確保正確訂購廠家提供的即用型試劑。

3.添加的捕獲/檢測試劑不足：確保向板中添加了正確量的試劑。

4.讀取器波長：確認您的平板讀取器上的波長設置正確，特別是在使用需要視覺停止的底物時。

5.底物溶液：使用正確的底物并檢查儲備溶液的有效期。

6.洗板：避免過度劇烈或長時間洗板，因為這可能會洗掉分析物或試劑。

7.干燥孔：防止孔變干，以避免出現不可預測的ELISA問題。

常見問題

解決方案

移液誤差

雖然通常歸因于移液誤差，但高 CV 也可能由樣品制備、試劑處理和清洗步驟中的錯誤造成。確保稀釋樣品混合正確，以避免重復樣品之間存在差異。

樣品準備

將稀釋樣品加入板中之前，大力混合或用移液器吸出稀釋樣品，以避免分析物分布不一致。

試劑準備

試劑（如捕獲抗體或檢測抗體）混合不當可能會導致不同孔中的試劑水平不同，從而增加 CV。

洗板

確保徹底、一致地洗板，以防止板上殘留基質成分，導致背景信號增加。

孔內氣泡

移液時盡量減少氣泡，因為氣泡會干擾分析物或試劑。讀取板前應消除所有可見氣泡。

邊緣效應

注意邊緣效應，這可能是由于板上的溫度差異造成的。控制溫度并確保適當的試劑混合可以緩解此問題。