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技術(shù)服務(wù)

試劑盒實驗操作視頻

試劑盒實驗視頻操作

實驗步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備

裂解液（RIPA）準(zhǔn)備-----每100 ul RIPA加入1 ul PMSF和1 ul的原釩酸鈉溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。加入PMSF，加入原釩酸鈉溶液。

組織樣本-----黃豆大小組織剪碎，加入200-300 ul配備好的裂解液，冰上研磨，12000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清。

貼壁細(xì)胞-----6孔板一個孔長滿，加150 ul配備好的裂解液，冰上裂解5-10 min，槍頭吹打，吸取裂解好的樣本，轉(zhuǎn)入EP管，12000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清。

懸浮細(xì)胞-----細(xì)胞轉(zhuǎn)入離心管，2000轉(zhuǎn)離心5 min，棄上清，加入PBS清洗，2000轉(zhuǎn)離心5 min，棄上清，每20 ul體系細(xì)胞加入150 ul裂解液，冰上裂解5-10 min，槍頭吹打充分裂解，12000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清。

2. 蛋白濃度測定

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

待檢樣本上樣

加入顯色劑，室溫避光20-30 min

酶標(biāo)儀測定OD值

計算蛋白上樣量（建議每樣本上樣總蛋白含量為50 μg）

3. 樣本變性

每40 μL蛋白，加10 ul的5XSDS 上樣緩沖液

沸水浴10 min

-20℃保存

4. SDS-PAGE膠制備

灌入分離膠

無水乙醇壓平

分離膠完全聚合后，倒出無水乙醇

雙蒸水沖洗

濾紙吸干

加入濃縮膠

插上梳齒

濃縮膠完全聚合后取出梳齒

5. 電泳

膠固定到電泳槽

倒入電泳液

加樣，加marker,

電泳----80 V恒壓至溴酚藍(lán)到濃縮膠與分離膠交界處，改110 V恒壓至溴酚藍(lán)到凝膠底部