產品名稱 : 人宮頸上皮細胞永生化細胞
基本形態 : 上皮細胞樣
培養條件 : 上皮細胞專用培養基
生長特性 : 貼壁生長
培養環境 : 37℃,5%CO2,95%AIR
備 注 : 該細胞為國內通過慢病毒 SV40T 轉染建立永生化,提供免疫熒光鑒定
細胞復蘇
1、從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養基重懸,接種 T25 培養瓶,于 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養;
4、第二天,換用新鮮完全培養基繼續培養。
細胞傳代
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時,棄 T25 培養瓶中的培養液,用 PBS 清洗細胞一次:
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3、棄上清,沉淀細胞用 1-2ml 完全培養基重懸,然后按 1:2 比例進行分瓶傳代(兩個 T25), 補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶,最后放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養;
細胞凍存
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時,棄 T25 培養瓶中的培養液,用 PBS 清洗細胞一次;
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3、棄上清,沉淀細胞加入 1ml/支的之禮無血清凍存液,混勻后加入凍存管中。
(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液)
4、將凍存細胞用程序降溫盒放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。