到貨處理
1、收到細胞后,首先觀察泡沫箱中干冰是否有剩余,凍存管是否完好,是否有解凍情況,若發現干冰完全汽化或凍存管有解凍現象,請及時拍照并與我們聯系。如果細胞簽收三天內 未與我們聯系,則默認為收貨良好。
2、復蘇第一管如有活性、狀態問題及時與我們聯系,會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。
特別說明:未與我方聯系擅自復蘇第二管出現問題不予售后。
細胞復蘇
1、從液氮灌或-80℃冰箱中查找到需要復蘇的細胞,水浴鍋提前打開預熱 37℃。
2、將查找到的凍存細胞在 37℃水浴中迅速搖晃解凍;
3、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的離心管中,1000rpm 離心 5min;
4、棄去上清液,補加 4-6mL 完全培養基后吹勻,接種于 T25 培養瓶中(或 6cm 皿中)。
5、培養過夜,第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代
1、如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
2、貼壁細胞用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次;
3、加 1-2mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培養箱中消化 1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后,加5mL 以上含 10%血清的完全培養基終止消化;
4、輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在 1000RPM 條件下離心 5-8min,棄去上清液;
5、將懸浮細胞和貼壁細胞收集到的細胞沉淀,加 1-2mL 完全培養基吹打混勻;
6、按 5-6mL/瓶補加培養液,將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 培養液的培養皿中或者培養瓶中。
(即 1 個 T25 傳代接種至 2~3 個 T25 或者 2~3 個直徑為 6cm 的培養皿)
細胞凍存
細胞收集參照傳代步驟 1~2;按凍存數量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱過夜,后續可轉入液氮罐中長期保存。
細胞收貨后處理
1、收到細胞后,首先觀察培養瓶是否完好,若發現培養瓶有破裂,培養基外溢、渾濁等現象,請及時拍照并與我們聯系。
2、用 75%酒精對培養瓶表面進行消毒處理,將培養瓶置于細胞培養箱中靜置培養 2~4 h,以恢復細胞狀態。
3、靜置完成后,取出培養瓶,顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存(40×,100×,200×各一張)前三天照片為重要售后依據。如發現細胞異常請及時與我們聯系,如果細胞簽收三天內未與我們聯系,則默認為收貨良好。
4、若細胞密度超過 80%,則可以根據提供的細胞培養步驟進行傳代或凍存;若細胞密度未達 到80%,收集懸浮細胞,加入 5mL 完全培養基到原瓶中,放入細胞培養箱中繼續培養。
細胞予重發
1.細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發。
2.收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發。
3.收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發。
4.常溫發貨細胞靜置2小時后,干冰凍存發貨細胞復蘇2天后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發。
5.常溫發貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后,出現污染經核實后,重發。
6.細胞活性問題在收到產品3天內提出真實實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發。
細胞不予重發
1.客戶操作造成細胞污染,不重發。
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發。
3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發。
4.細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片,不重發。
5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發。
6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發。