細胞名稱

HEK293-H293-H細胞

細胞品牌

通蔚生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞英文

HEK-293-H ; HEK 293-H ; HEK-293H ; 293-H ; 293 H ; 293H

細胞來源

Thermo Fisher Scientific

細胞簡介

293-H細胞是從原始293細胞株中克隆得到，可用CD 293培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。293細胞系是從人原代胚胎腎中建立的一個永久性細胞系，它采用剪切的人5型腺病毒DNA進行轉(zhuǎn)化。E1A腺病毒基因在這些細胞中表達，參與一些病毒啟動子的反式激活，使這些細胞產(chǎn)生非常高水平的蛋白質(zhì)

細胞特點

直接在CD 293培養(yǎng)基或293 SFM II培養(yǎng)基中快速解凍至懸浮培養(yǎng)基；更快的生長、良好的粘附性、優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率和高蛋白表達水平；低通道主細胞庫的記錄譜系；質(zhì)量和性能測試

種屬來源

人

組織來源

胚腎

疾病特征

正常

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

懸浮

培 養(yǎng) 基

293 SFM II或CD 293的完全培養(yǎng)基+4mM谷氨酰胺?-I或L-谷氨酰胺

生長條件

氣相：空氣中含7-9%二氧化碳的增濕空氣; 溫度：36-38 ℃

傳代方法

1：2至1：6，每周2次

凍存條件

-200°C至-125°C，液氮儲存

細胞培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：293 SFM II或CD 293的完全培養(yǎng)基+4mM谷氨酰胺?-I或L-谷氨酰胺。

細胞系：293人胚胎腎細胞。培養(yǎng)類型：貼壁或懸浮（軌道振動臺以120–130轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)）。培養(yǎng)容器：T形瓶或搖瓶。溫度范圍：36-38°C。培養(yǎng)箱氣體：空氣中含7-9%二氧化碳的增濕大氣。同時，確保在搖床中的氣體流通和交換。

支原體檢測

陰性

發(fā)貨方式

快遞運輸(特殊情況的另處理)

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，不得用于其它用途

處理1

收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們

處理2

請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基

處理4

如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基

處理5

接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系

復(fù)蘇細胞

將含有1mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代

如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng):

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞凍存

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說明

上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。