致瀉性大腸桿菌(致瀉性大腸埃希氏菌)通用PCR試劑盒

產品及特點：

能夠引起腸道內急性腹瀉的大腸桿菌統稱為致瀉性大腸桿菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）根據致病性的不同，致瀉性大腸埃希菌被分為五種，即腸致病性大腸埃希氏菌(EPEC)、腸產腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC)、腸侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)、腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)和粘附性腸埃希氏菌(EAEC)。，我國發生的食物中毒事件中，細菌性食物中毒的人數最多，占總中毒人數的 42.8％，其中致瀉性大腸埃希氏菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病的常見病原菌，在我國引起感染性腹瀉的發病率居所有傳染病之首，因此快速靈敏檢測致瀉性大腸桿菌具有重要意義。

本產品是根據 PCR 原理開發的致瀉性大腸桿菌通用檢測試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用，與其他病原沒有交叉反應。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規格及成分：

編號	成分	規格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌）用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌通用 PCR 陽性對照1×10E8 /μL	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設置 PCR 反應(40μL 體系)：

3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌通用PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對照致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌通用PCR陽性對照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4.按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35個循環	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

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致瀉性大腸桿菌(致瀉性大腸埃希氏菌)通用PCR試劑盒說明書
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