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產品簡介
產品名稱 ：人真皮微血管內皮細胞
產品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：皮膚組織
產品規格 ：5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
人真皮微血管內皮細胞分離自真皮組織。真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質內。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網狀層。
真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質。微血管內皮細胞(M EC) 在炎癥反應、腫瘤生長、創面愈合過程中起著非常重要的作用。在創面愈合研究領域，由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養技術的成熟，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比，對參與創面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內皮細胞，則因其體外分離培養技術的困難而使相關的研究受限。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人真皮微血管內皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、最后通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的人真皮微血管內皮細胞經C D 31免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明膠(0. 1%)
培 養 基 ：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態 ：內皮細胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人真皮微血管內皮細胞體外培養周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
人真皮微血管內皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈內皮細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm ，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱靜置5-7min) 。消化完向離心管內加入5ml完全培養基終止消化。
3) 經1000rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養基(補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基(37℃預熱) 。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
