中文名稱： Flag抗體親和凝膠

英文名稱：Anti-Flag Affinity gel

相關類別：抗體相關支持試劑

儲存：冷藏（2-8℃）不可凍存

概述

Flag抗體親和凝膠是以小鼠抗Flag單克隆抗體和高交聯度的瓊脂糖凝膠結合而成，雜蛋白非特異性結合少，可用于Flag標簽融合蛋白的純化和免疫沉淀。

特點

φ45-165 μm，1ml凝膠最少可結合1mg Flag標簽蛋白

應用

純化，免疫沉淀

使用說明

1. 純化
1.1 填料準備：取適量的凝膠加入層析柱中，流干保存液，加入5倍柱體積（凝膠體積）的平衡液清洗。
1.2 加入樣品溶液，室溫震蕩孵育30分鐘(不能用磁力攪拌器攪拌)，確保填料與樣品溶液充分混合。
1.3 孵育完畢后，將填料混合液離心：1000g，5分鐘，或過濾收集填料。
1.4 將填料裝入層析柱中，用平衡液清洗4-5次，直至紫外檢測值穩定。
1.5 洗脫
1.5.1 酸性洗脫：加入5倍柱體積的酸性洗脫液，收集管中預先加好中和液20 μl中和液/ml洗脫液，分管收集。注意：酸性洗脫后填料要立即用平衡液平衡，Anti-flag Affinity gel在洗脫液中不要超過20分鐘。
1.5.2 競爭性洗脫：使用5倍柱體積的競爭性洗脫液flag多肽0.5 mg/ml洗脫，30℃孵育10-15分鐘，重復1-2次，分管收集。
1.6 使用3倍柱體積的酸性洗脫液再生凝膠，然后用平衡液平衡至中性。 1.7 加入保存液，2-8℃保存。
2. 免疫沉淀 2.1 取20-100μl的Anti-flag Affinity gel加入到2ml 離心管中，離心：5000g，30秒，棄去上清。
2.2 加入0.5ml平衡液，懸浮填料，離心：5000g，30秒，棄去上清。重復一次。
2.3 加入200-1000μl樣品裂解液，與填料混合均勻，置于旋轉混合儀上輕輕旋轉離心管，使樣品和填料充分接觸并吸附，室溫1小時。混勻后離心：5000g，30秒，吸取上清，留樣檢測。
2.4 洗滌：加入0.5ml的洗滌液，懸浮填料，進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，離心：5000g，30秒，棄去上清。重復3次。
2.5 變性洗脫：加入5μl 5X變性洗脫液，沸水浴煮沸5分鐘。離心：5000g，30秒，吸取上清進行SDS-PAGE電泳檢測。
注意：變性洗脫液中含有SDS，會使偶聯的Flag抗體變性，洗脫后的凝膠不可重復使用。

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Flag抗體親和凝膠說明書
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